農(nóng)藥殘留主要檢測方法有兩種：

1.色譜檢測法：

色譜檢測法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。色譜法（包括氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用等）。

優(yōu)點：靈敏度高、準(zhǔn)確、定性定量；

缺點：成本高、操作復(fù)雜、時間較長。

2.速測儀法：

速測儀法只能作為農(nóng)殘定性分析，易于在基層推廣等特點，是目前我國控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國內(nèi)和我省應(yīng)用最廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測方法。

速測儀法的主要優(yōu)點：

1、該方法具有快速方便、前處理簡便、成本較低等優(yōu)點，適用于現(xiàn)場定性測定，特別適合在蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場及農(nóng)產(chǎn)品檢測部門開展快速檢測工作。

2、該方法可對有農(nóng)藥殘留的蔬菜進行粗篩，將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場之外，避免因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。

速測儀法的主要缺點：

1、酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定，檢測結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好，實際應(yīng)用中的確認率大約為60%~70%左右；

2、存在檢測盲區(qū)，只能檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，不能檢測有機氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥；

3、不適合檢測蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽性的農(nóng)產(chǎn)品。

速測儀的檢測方法有兩種：

1、速測卡法（紙片法）

試劑

固有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測卡），pH7.5緩沖液溶液：分別取15.0g磷酸氫二鈉與1.59g無水磷酸二氫鉀用500mL蒸餾水溶解。

儀器

常量天平   有條件配備37℃±2℃恒溫裝置。

分析步驟

整體測定法

表面測定法（粗篩法）

結(jié)果判定：

1、結(jié)果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。

2、與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略淺藍色均為陽性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。

3、對陽性結(jié)果的樣品，可用其他分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

速測卡法（紙片法）注意事項

1、有些蔬菜如生姜、蔥、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破壞酶活性或者使藍色產(chǎn)物褪色的物質(zhì)，處理這類蔬菜時，不要讓其汁液太多釋放出來，不要剪得太碎，浸提時間不易過長，必要時可采用整枝蔬菜浸提或采用表面測定法進行測定。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可以采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。

2、試紙上的提取液不可太多而溢出試紙，亦不可太少而使反應(yīng)不完全。

3、最好將每一批樣品處理好后一起加樣，一面時間過長蒸干。

4、當(dāng)溫度條件低于37℃，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時間相對延長，延長時間的確定，應(yīng)以空白對照卡用（體溫）手指捏3分鐘時可以變藍，即可往下操作。注意樣品放置的時間應(yīng)與空白對照卡放置的時間一致才有可比性。

5、空白對照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕潤，二是溫度太低。

6、如有條件，將農(nóng)藥速測卡放在10℃以下保存效果會更好，每小包產(chǎn)品開封后最好在三天內(nèi)用完，如用不完，可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封保存，如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥測速卡的紅色藥片由鮮紅橙色變?yōu)榘档暮旨t色，說明紙片已吸潮失效。

2、酶抑制率法（分光光度法）

根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲中毒致死的原理而設(shè)計。如果蔬菜中不含有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，乙酰膽堿酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。如果蔬菜中含有可以抑制乙酰膽堿的活性的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就不能被水解，從而無顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酶和顯色劑，用此判斷有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。

試劑

1.pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1000mL蒸餾水溶解。

2.顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20m了緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。

3.底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過兩周。

乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化ΔAo值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀^四天。

可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔAo值應(yīng)控制在0.3以上。

儀器

1.分光光度計或相應(yīng)測定儀及常量天平。

2.分析步驟

樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取液瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出提取液，靜置3~5min，待用。

對照溶液測試：先于試管中加入2。5mL緩沖溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上（每批樣品的控制時間應(yīng)一致）。加入0.1mL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAo。

樣品溶液測試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其他操作與對照溶液測試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAt。

結(jié)果的表述計算

1、檢測結(jié)果按公式計算：

2、抑制率（%）=[（ΔAo-ΔAt）/ΔAo]×100

3、式中：ΔAo…對照溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值：

4、ΔAt…樣品溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值：

結(jié)果判定

1、結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陰性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上。對陽性結(jié)果的樣品，可用其他方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

河南冠宇儀器有限公司生產(chǎn)的新一代智能型農(nóng)藥殘留檢測儀；是根據(jù)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法（NY/T 448-2001）和國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T5009.199-2003）中的酶抑制率法，嚴(yán)格遵循《GB/T5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測方法標(biāo)準(zhǔn)》中的規(guī)定對蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測。廣泛應(yīng)用于各級政府蔬菜檢測中心、農(nóng)貿(mào)市場、超市、環(huán)保機構(gòu)、蔬菜種植基地、飯店、車載及實驗室等食品安全檢測與監(jiān)控場所等單位對果蔬中農(nóng)藥殘留的檢測。能準(zhǔn)確、快速檢測出蔬菜、水果、糧食、茶葉以及土壤中有機磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥殘留的快速檢測。

酶抑制率法注意事項

1、蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提方法，減少色素的干擾。

2、當(dāng)溫度條件低于37℃，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長，延長時間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化ΔAo值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時間應(yīng)與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對照溶液3min的吸光度變化ΔAo值<0.3的原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。

3、當(dāng)吸光度大到無法讀取時，說明測定液渾濁有干擾。

4、待測樣品放入分光光度計速度的影響。待測樣品加入底物后，應(yīng)馬上搖勻，放入測定儀，否則影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

5、比色杯的透光度影響。保持比色杯的清潔，使比色杯有好的透光度是減少檢測誤差的必要性。比色杯可定期用乙醇進行清洗。

6、微量移液器的影響。微量移液器要專用，貼上標(biāo)簽，避免交差使用造成實際污染：堅持只吸不進的原則，防止試劑污染。

7、藥品配制過程中的影響。磷酸鹽緩沖液的配制一定要用蒸餾水、純凈水或者離子水，不可使用礦物質(zhì)水，否則在測量過程中干擾較大，影響準(zhǔn)確性。

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